La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Biotecnología de Ia Estación Experimental Sapecho, dependiente de la Facultad de Agronomía de la UMSA. En Bolivia Ia producción de banano, se ve limitada por diferentes problemas, entre estos podemos mencionar a Ias enfermedades provocadas por hongos, bacterias y virus, Ias enfermedades más importantes causadas por hongos se encuentran Ia Sigatoka Negra (Mycosphaerella fijiensis), Sigatoka Amarilla (Mycosphaerella musicola) y el Mal de Panamá (Fusarium oxysporum). Una forma de obtener plantas Libres de patógenos es a través del cultivo de tejidos in vitro. El presente trabajo se realizó con el objetivo de evaluar tres métodos de desinfección y tres medios de cultivo para Ia introducción y establecimiento in vitro banano (Musa sp. AAA) Var. Gran Naine en el Laboratorio de Biotecnología de Ia Estación Experimental Sapecho. El trabajo se realizó en tres métodos de desinfección propuestos por: método I EES, (2018), método II Ubilla, (2016), método III; Medina et.al, (2015). Las variables de estudio fueron: Ia contaminación por hongos, bacterias, oxidación, sobrevivencia y contaminación total. Los medios de cultivo que se ensayaron fueron: medio de cultivo I CATIE, (2016), medio de cultivo ll; Colmenares y Giménez (2001), medio de cultivo III Medina et.al, (2015), tomando como variable de respuesta Ia altura y diámetro del explante. El análisis estadístico utilizado para Ia evaluación de los datos fue el Diseño Completamente a Azar (D.C.A.) con arreglo Bi factorial (métodos de desinfección y medios de cultivo) con tres repeticiones por tratamiento y 4 unidades experimentales por repetición. De acuerdo a los resultados obtenidos, con el método II; propuesto por Ubilla, (2016), la contaminación por hongos fue del 39% siendo la más eficiente; mientras que con el método de desinfección III, Medina et.al, (2015), se obtuvo una menor contaminación de bacterias y oxidación fenólica, con 38,8% y 39% de contaminación respectivamente; asimismo con respecto al grado de sobrevivencia de explantes con este método III fue Ia más eficiente (61%); con respecto a los medios de cultivo para Ia altura se encontró en el medio de cultivo II propuesto por Colmenares y Giménez (2001), con 1,7 mm. En cuanto al diámetro el mejor resultante fue el medio de cultivo I propuesto por CATIE (2016), con 1,65 mm. La evaluación de los costos parciales se obtuvo un costo menor para método de desinfección III con un total de 21 Bs. En cuanto para los costos parciales en preparación de medios de cultivo se tomó en cuenta Bs/Lt, donde el medio de cultivo II presentó un costo menor de 70 Bs.